Rybrevant （amivantamab）是靶向EGFR/cMET的特异性双抗。 ① 表皮生长因子EGFR: EGFR 是一个单跨膜受体蛋白，定位在细胞膜上，膜外部分负责和配体结合，膜内部分在激活条件下，拥有酪氨酸激酶的活性。 EGFR以单体形式存在时，没有酪氨酸激酶活性。很多配体能和EGFR结合，如EGF，TGF-α，epigen等等。当受体-配体结合后，两个带有配体的EGFR分子形成二聚体后，具有酪氨酸激酶活性，二聚体自身磷酸化，激酶活性进一步增强，把下游信号通路中的蛋白磷酸化，如RAS，MAPK，PLCG等等，从而激活下游的信号通路。 信号通路被激活后，EGFR可以促进细胞的增殖，分化和迁移。信号通路如果处于过度激活状态，则导致细胞增殖分化异常，促进肿瘤的发生。肺癌的类型多样，和多个细胞信号通路过度激活有关，如果EGFR在肿瘤细胞中有结构变异和数量变异，异常磷酸化，则下游信号传导通路被激活，诱导肿瘤发生。 针对EGFR变异的抗肿瘤药物，有酪氨酸激酶抑制剂TKI，TKI与ATP竞争EGFR的酪氨酸激酶活性中心，抑制EGFR磷酸化，进而抑制EGFR对下游信号通路的激活作用。抗体类药物，在胞外通过阻断配体的结合来阻断对EGFR的激活，信号传导通路失活。 ② HGF/c-MET c-MET也是一种酪氨酸激酶受体，主要表达于上皮细胞表面，其胞外区和配体结合。肝细胞生长因子（HGF）是目前已知的c-MET的配体，由间质细胞分泌，HGF和c-MET结合后，形成磷酸化的c-MET，c-MET形成二聚体，C末端的酪氨酸残基发生磷酸化，引起更多的底物蛋白磷酸化，和细胞内一系列信号传导，如PI3K／AKt，RAS／MAPK，STATs。这些信号在诱导细胞生长、存活、转移及血管形成方面起着重要的作用 。 HGF/c-MET通路的正常运转是胚胎发育，器官再生，伤口愈合的关键因素，通路的正常活化对于细胞的生长发育是必须的。 而HGF/c-MET通路在多种肿瘤中异常活化，引起c-MET基因的过表达，扩增和突变等，最终促进肿瘤的生长，侵袭和转移。 c-MET受体和其他膜受体，如EGFR之间还存在着相互作用机制，共同促进肿瘤发生，c-MET在多种恶性肿瘤中有异常表达，也是抗肿瘤治疗的重要靶点。氨酸激酶抑制剂TKI对c-MET/HGF异常表达的这类肿瘤患者治疗有效，但是也同样存在耐药性问题。 强生的这款Rybrevant双抗，在以往文献中常以JNJ-61186372这个名字出现，是一个靶向EGFR/c-MET的双特异性抗体，抗体类型为异二聚体的IgG1型，Fab两臂段分别靶向于EGFR及c-MET。抗体的制备是采用GenMab公司开发的基于可控Fab片段交换技术(cFAE)的Duobody平台。 在cFAE技术中，将一对匹配的变异分别引入到两个母本抗体的CH3区域，即结合cMET的IgG1分子在CH3结构域存在K490R突变，而结合EGFR的IgG1分子在CH3结构域存在F405L突变。两株母本抗体质粒分别转染用于去除岩藻糖基化的CHO细胞后，得到两种低水平表达岩藻糖的母体抗体。 分别将两种抗体进行纯化后，再进行混合，在氧化还原的环境下完成Fab-arm交换，形成双特异性抗体。用这种方法可以获得超过90%的异源二聚体。 研究初期，选取了5种抗c-MET的母本单抗（A，B，C，D，E），8种抗EGFR的母本单抗（A，B，C，D，E，F，G，H），经过组合得到40株抗EGFR/c-MET双抗。对这40株抗体进行层层筛选。 ① 结合实验：要求EC50＜1ug/ml。 ② MET磷酸化：选取能抑制MET磷酸化的抗体。 ? 弃去EC50>1ug/ml，不能抑制MET磷酸化的抗体。 ③ 细胞增殖实验：能够有效抑制HGF-cMET/EGFP信号传导途径激发的细胞增殖。 ? 弃去上述不能有效抑制细胞增殖的抗体。 ④ EGFP磷酸化实验： ? 弃去EGFP磷酸化不能受到抑制的抗体。 最终MET B×EGFR H BsAb综合评分最高，即后来成药的amivantamab。 JNJ-6372的双抗结构使得两株不同靶点的抗体通过协同作用表现出更高的抗肿瘤水平。 抗体去岩藻糖的特性使抗体和FcrRIIIa结合更紧密，增强Fc介导的ADCC效应。 双抗能降低EGFR以及c-Met的表达量，细胞上的受体数量减少。 促进EGFR以及c-MET的内吞作用，并利用溶酶体将其降解。 双抗能抑制EGFR以及c-Met的磷酸化，抑制受体相关的下游信号通路的表达激活。 阻断信号通路激活并向下游传递信号，可抑制肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。 通过Fc受体介导ADCC，ADCR效应。 单核细胞和巨噬细胞的胞啃作用诱导的受体下调和抗肿瘤作用。 JNJ-61186372双抗的两臂中，EGFR结合臂来源于Zalutumumab的序列，识别表位位于EGFR功能区III。靶向c-MET的结合臂能阻断肝细胞生长因子(HBF)结合。Fc段来自一个针对无关抗原(HIV gp12)的人源化全抗。 JNJ-61186372在对TKI敏感的EGFR突变型非小细胞肺癌模型的临床前活性检测和进行中的临床试验中展现出很好的抗肿瘤活性，疗效遍及各种EGFR突变型(EGFR C797S，T790M，ex20ins以及MET扩增)。 尤其耀眼的结果是，JNJ-61186372对EGFR ex20ins有疗效。在Ba/F3细胞（EGFR有ex20ins突变）和患者来源细胞/类器官/异种移植动物模型中，通过有效下调EGFR/cMet水平和诱导细胞凋亡等作用抑制细胞增殖，发挥抗肿瘤作用。 2019年ASCO年会上公布的数据显示，在I期临床实验中，27例存在EGFR ex20ins的NSCLC患者入组，其中20例可评估疗效，客观缓解率(ORR)达到30%，疾病控制率(DCR)达到100%。 2020年ASCO年会上公布的数据，有50名EGFR ex20ins的NSCLC患者入组，29名患者既往曾接受含铂类药物化疗，在39名可评估疗效患者中的客观缓解率ORR达到36%，临床获益率为67%，中位无进展生存期mPFS=8.3m，29名既往接受含铂药物治疗患者客观缓解率ORR=41%，中位无进展生存期为mPFS=8.6m。 2021.05.23 ，Rybrevant成为第一个获批用于EGFR ex20ins突变阳性的NSCLC的靶向疗法。此外，Rybrevant在多种EGFR突变疾病的患者中显示出治疗活性：EGFR C797S，T790M，ex20ins和MET扩增，相信很快该药获批的适应症会进一步得以扩增。
04 Rybrevant溯源
作用机制
临床前/临床实验
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